基于脂质纳米颗粒（LNPs）的mRNA疫苗在抗击传染病方面具有巨大的优势。然而，mRNA LNPs疫苗的促炎特性可能会阻碍抗原特异性耐受性免疫反应的诱导。哮喘作为一种过敏性炎症疾病，一般治疗方法只能缓解哮喘症状，很难预防疾病的恶化。
2025年2月，郑州大学第一附属医院医学研究中心的秦志海、王发展团队，在国际知名学术期刊Advanced Science（IF=15.1）发表题为：A Spleen-Targeted Tolerogenic mRNA-LNPs Vaccine for the Treatment of Experimental Asthma的文章。开发了一种新型脾脏靶向的耐受性mRNA疫苗，通过诱导耐受性树突状细胞（tolDCs）和调节性T细胞（Tregs）来治疗过敏性哮喘，为过敏性疾病新型防治药物提供新策略。
在这项研究中，作者使用了近岸蛋白mRNA原液制备的全套产品，用于后续LNPs包封后的体内体外实验。
| 目录号 | 产品名称 |
| E131 | T7 High Yield RNA Transcription kit |
| GMP-S042 | N1-Me-Pseudo UTP, GMP Grade |
| GMP-S201 | CAP1 GAG, GMP Grade |
| GMP-M012 | E.coli Poly(A) Polymerase |
通过制备含有硬脂酸的LNPs，并共载核酸修饰的mRNA和雷公藤红素（Cel），发现Cel的加入并未显著改变LNPs的粒径、电位或mRNA包载效率；动态光散射（DLS）和透射电子显微镜（TEM）分析发现，该疫苗能特异性靶向脾脏，并被脾脏树突状细胞（DCs）高效摄取，且Cel的加入不影响脾脏细胞对LNPs的摄取；采用荧光标记和流式细胞术检测LNPs在脾脏中的分布和细胞摄取情况，发现具有良好的脾脏靶向性和细胞摄取特性。
使用骨髓来源的树突状细胞（BMDCs）评估Cel对DCs成熟的影响，发现LNPs能显著抑制脂多糖（LPS）诱导的BMDCs成熟，表现为共刺激分子表达降低。流式细胞术检测共刺激分子（CD40、CD80、CD86）和MHC-II的表达，发现该疫苗诱导BMDCs分化为耐受性DCs，表现为抗炎细胞因子（如TGF-β和IL-10）表达增加，促炎细胞因子（如IL-6和IL-1β）表达降低；使用RNA测序分析基因表达差异，发现Cel通过抑制NF-κB信号通路实现耐受性DCs的分化。
在体外实验中，将BMDCs与不同处理的LNPs共培养后，与CD4+T细胞共培养，检测Tregs的生成，表明Cel处理的LNPs能显著诱导Tregs生成，且Tregs具有抑制Th2细胞分化的功能；在体内实验中，通过尾静脉注射疫苗，检测脾脏和肺部Tregs的生成和迁移，表明Cel处理的LNPs能诱导脾脏中抗原特异性Tregs的生成，并迁移到肺部发挥免疫抑制功能。
使用OVA诱导的过敏性哮喘小鼠模型，评估疫苗对肺部炎症、黏液分泌和免疫细胞浸润的影响，发现显著减轻了哮喘诱导的肺部炎症和黏液分泌，减少了肺部嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的浸润，降低了OVA特异性IgE和Th2细胞因子（IL-4、IL-5、IL-13）的水平。表明该疫苗对实验性哮喘具有显著预防效果。
通过免疫荧光染色和流式细胞术分析肺部和脾脏中免疫细胞的浸润和激活状态，发现耐受性疫苗显著减少了肺部炎症单核细胞的浸润，增加了Tregs的积累；在脾脏中抑制了DCs、B细胞、CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的过度激活，并增加了Tregs数量。表明该疫苗通过调节肺部和脾脏的免疫微环境，减轻了哮喘的严重程度。
在体外评估Cel对BMDCs的毒性，发现无显著毒性；在体内评估疫苗对主要器官的毒性，检测血清中肝肾功能指标，未观察到明显的器官毒性或肝肾功能异常。表明该疫苗具有良好的生物相容性。
这篇文章开发了一种针对实验性哮喘治疗的脾脏靶向耐受性mRNA LNPs疫苗。通过将mRNA和Cel共同载入含硬脂酸的LNPs中，实现了对脾脏的靶向递送。不仅能诱导脾脏中的DCs分化为耐受性表型，还能促进抗原特异性调节性Tregs的生成，并使其迁移到肺部发挥免疫抑制功能。在过敏性哮喘小鼠模型中，显著减轻了哮喘症状，并减少了嗜酸性粒细胞的积累和黏液分泌，展现出良好的预防和治疗效果。此外，该疫苗在体外和体内均显示出优异的生物相容性，为未来临床应用提供了可能性。